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讓專業(yè)人員告訴你使用細胞計數(shù)板時一定要注意哪些事

更新時間：2021-08-03

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細胞計數(shù)板是一種常用的細胞計數(shù)工具，醫(yī)學(xué)上常用來計數(shù)紅細胞、白細胞等而得名，也常用于計算一些細菌、真菌、酵母等微生物的數(shù)量，是一種常見的生物學(xué)工具。

細胞計數(shù)板的注意：

鏡檢計數(shù)室。因前一次清洗不到位，或者保存過程中存在污染，更或者因操作不當導(dǎo)致的計數(shù)室存在劃痕，若不及時清洗或更換，則會對后期實驗計數(shù)產(chǎn)生極大影響。所以，在每次使用血球計數(shù)板之前都需要加一步鏡檢計數(shù)室，如若在鏡檢時發(fā)現(xiàn)計數(shù)室有污物，則需按要求清洗并吹干后再進行實驗。

搖勻后取液。在吸出培養(yǎng)液進行計數(shù)之前，需輕輕震蕩試管，使菌體分布均勻，防止聚沉淀，從而提高計數(shù)的代表性和準確性。

先蓋血蓋片后加菌液。在菌懸液搖勻后，應(yīng)先在血球計數(shù)板上蓋上血蓋片，再用滴管吸取少許菌懸液，從計數(shù)區(qū)中間平臺沿血蓋片的上邊緣滴入一小滴菌懸液，利用液體的表面張力一次性充滿計數(shù)區(qū)。若先加菌液再覆蓋血蓋片，則容易因為菌液加入過多，而導(dǎo)致血蓋片未與血球計數(shù)板支持柱接觸，血蓋片浮于菌液上方而導(dǎo)致最后計數(shù)偏大，同時會因為有氣泡產(chǎn)生而導(dǎo)致計數(shù)偏小。

靜置片刻再計數(shù)。靜置5min，待菌懸液不再漂浮流動，酵母菌全部沉降后再將血球計數(shù)板放到顯微鏡下進行計數(shù)。先在低倍鏡下找到需要觀察計數(shù)的大方格及中方格，將中方格移到視野中央，然后撥動轉(zhuǎn)換器移至高倍鏡進行計數(shù)。

高倍鏡下調(diào)亮度。低倍鏡下，用平面鏡和小光圈，可以清晰地看到血球計數(shù)板上的酵母菌。但是，撥動轉(zhuǎn)換器換到高倍鏡后，即使是用了平面鏡和最小光圈，視野里往往還是白茫茫一片，什么都看不見，這時候可以嘗試操作遮光器上的金屬遮光片進行遮光處理。因為活的酵母菌和培養(yǎng)液的折光率相近，所以要在高倍鏡下將視野調(diào)得暗一些。

掌握計數(shù)原則。一般選擇觀察的菌液濃度控制在每個小方格內(nèi)有4或5個菌體為宜，若其濃度太高，可適當稀釋；并采用“計上不計下，計左不計右”的計數(shù)原則。

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